原代細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程是怎么樣的
導(dǎo)讀原代細(xì)胞是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。常把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞培養(yǎng)需經(jīng)過(guò)準(zhǔn)備、處理、剪切、消化分離、計(jì)數(shù)、培養(yǎng)這幾個(gè)階段。原代細(xì)胞的培養(yǎng)得保證無(wú)菌環(huán)境,并且細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)成分得充足。...
原代細(xì)胞是指從機(jī)體取出后立即培養(yǎng)的細(xì)胞。一般情況下,常把培養(yǎng)的第1代細(xì)胞與傳10代以內(nèi)的細(xì)胞統(tǒng)稱為原代細(xì)胞培養(yǎng)。原代細(xì)胞培養(yǎng)需經(jīng)過(guò)準(zhǔn)備、處理、剪切、消化分離、計(jì)數(shù)、培養(yǎng)這幾個(gè)階段。具體說(shuō)明如下:
1、準(zhǔn)備:取各種已消毒的培養(yǎng)用品置于凈化臺(tái)面,進(jìn)行操作前的洗手、消毒。
2、處理:點(diǎn)燃酒精燈,把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2-3次,去除血污。
3、剪切:用手術(shù)刀將組織切成若干小塊,加入比組織塊總量多30-50倍的胰蛋白酶液,然后一并倒入三角燒瓶中,結(jié)扎瓶口或塞以膠塞。
4、消化分離:將三角燒瓶置于用恒溫水浴,每隔20分鐘搖動(dòng)一次,在消化過(guò)程中發(fā)現(xiàn)消化液混濁時(shí),可在鏡下觀察,如果組織已分散成細(xì)胞團(tuán)或單個(gè)細(xì)胞,立即終止消化,進(jìn)行低速分離后加入適量含有血清的培養(yǎng)液。
5、計(jì)數(shù):用計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),對(duì)大多數(shù)細(xì)胞來(lái)說(shuō),pH需要控制在7.2-7.4范圍內(nèi)。
6、培養(yǎng):置于37℃的CO2溫箱培養(yǎng),瓶口需用紗布棉塞或螺旋帽堵塞,紗布棉塞易生霉菌,每次換液時(shí)需要換新塞。
注意,原代細(xì)胞的培養(yǎng)得保證無(wú)菌環(huán)境,并且細(xì)胞生長(zhǎng)所需要的營(yíng)養(yǎng)成分得充足。